默認站點
廣州市鷹洲科技有限公司 刑警好幫子

Tel:020-87511070
Fax:020-87511229

產品系列

新聞資訊

全新樣品制備技術:壓力循環技術提取骨骼DNA

2016/7/8 14:47:01

全新樣品制備技術:壓力循環技術提取骨骼DNA

2016-07-08 



利用壓力循環系統提取骨骼DNA



在法醫實踐研究中,有關DNA的檢驗已經成為對個體進行識別鑒定的常規技術之一。骨骼是一種比較特殊的生物檢測材料,因為外部有堅硬的保護組織,所以相對于人體的其他組織臟器器官的降解比較慢。但對于高度腐化及白骨化的樣本來說,骨骼是進行DNA檢測的有效檢測材料之一。



骨骼DNA

骨骼DNA主要來自于三種細胞,包括骨細胞、破骨細胞以及成骨細胞。由于外層有堅硬的骨密質保護,骨骼較人體的其他組織器官的腐敗程度要慢,并在外界環境的影響下,骨骼酶的消化更加緩慢,因此骨骼在更好地保存DNA的同時,也加大了其中DNA提取難度。




由于骨骼中DNA 獨有的特性及DNA 含量少, 使得此類檢材在DNA提取的方法上存在前處理時間長, 工作強度大, DNA檢出成功率低等問題。




傳統方法與問題



目前, 已報道的幾種骨骼DNA 提取方法如Chelex - 100 法[ 1] , 有機提取法[ 2] , CTAB 法[ 3] , 玻璃奶法[ 4] , 硅珠法[ 5] 等。這些方法一般需要復雜的前處理, 脫鈣、有機純化等步驟, 繁瑣的操作步驟加劇了DNA 流失, 也增加了污染的可能。


在低密度病原及一些較難提取樣品中,檢測及定量分析絲核菌、腐霉菌及其它通過土壤傳播的病原體時,盡管利用的是快速診斷裝置如實時定量PCR,但結果極其不穩定。原因在于,樣品制備在生物樣品制備過程中一直是一個瓶頸。一些特殊的DNA,RNA及小分子采用傳統的方法無法有效地提取出來。




揭秘新技術——PCT 超高壓循環技術

pressure cycling technology)




全自動超高壓與常壓之間快速循環直接導致細胞膜或核膜的脂質雙分子層的平衡狀態被打破,脂質雙分子膜破壞,進而使細胞內的蛋白或細胞器或細胞核內的DNA、RNA釋放出來。


超高壓循環技術利用快速交替的高壓和低壓變換促使細胞溶解或裂解。使用時,將細胞懸浮液或組織放在特別設計的處理容器中(PULSE Tubes),再放在一個壓力循環裝置中的進行交替的高壓和低壓處理。哈佛科學家結合壓力循環裝置和PULSE Tubes共同組成了超高壓循環樣品制備系統(PBI)。特別強調的是, 在PULSETube中,壓力可以在小于3秒的時間內增加到 35,000PSI ,在遠遠小于1秒的時間內從35000PSI回到周界壓力,從而這是一項全新的樣品制備技術。這項新的專利技術可以在許多已經成熟的和剛剛出現的生物領域中得到廣泛應用,包括蛋白組學和基因組學樣品前處理,病原體滅活,催化反應的控制,免疫診斷和蛋白質純化、轉錄組學等的樣品前處理,和蛋白質結構研究。目前,超高壓循環樣品制備系統主要應用在以下領域:生物技術、抗生素、藥物研發、刑偵取證、農業、水產業、環境科學、和古生物學。



關于骨頭

由于骨頭的堅硬,現在對于從骨頭碎片中提取DNA常常包含粉碎的步驟。粉碎過程非常費時,而且不安全,因為粉碎設備常常是反復使用的,容易與其他樣品交叉污染。粉碎之后又常常需要脫鈣、氯仿抽提等復雜過程。


超高壓循環樣品制備系統(PBI)是一個封閉的系統結合使用PULSE TUBES一次性的壓力循環管有效解決易污染的問題,直接利用高壓低壓的交替作用, 使DNA能從致密的骨骼組織中直接釋放出來, 省去了較長時間粉碎、脫鈣和消化步驟,從而提高從骨頭碎片中提取DNA的安全性、速度和簡便性。



QQ圖片20160708163315.png

PULSE TUBES


該系統的優點在于:重現性好,效率高,快速,安全,平行性好。


.


在公安部鑒定中心的刑事技術中的《探討建立利用壓力循環技術提取骨骼DNA的新方法》刊文得知,使用11個不同部位骨骼樣品分成 3組,一組采用本實驗室常規方法處理骨骼,一組采用壓力循環儀處理骨骼,另外一組作為陰性對照,然后統一進行DNA的提取及定量。結果采用壓力循環技術提取骨骼DNA時間比實驗室常規方法縮短24小時以上,提取效率提高6%~49%。結論壓力循環技術可以作為一種提取骨骼DNA提取的新方法之一。



1

超高壓循環樣品制備系統(PBI)

QQ圖片20160708163342.png

可以作為提取骨骼DNA 的備選設備, 當然利用壓力循環儀也可以提取血液、毛發及牙齒DNA。法醫上的樣品(物證)量常常很小,而且其生物分子活性常常相對比較低。若樣品量?。ū热珙^發皮膚和血跡等)而難以對其進行核酸DNA分析時,線粒體DNA同樣可以提供一些重要信息,這是由于人類細胞中可含有數以千計的線粒體DNA拷貝但卻只有2個核酸DNA的拷貝。而該系統的高壓循環技術可安全、有效、快速的提取法醫樣品中的線粒體DNA。

SEE MORE →


QQ圖片20160708163303.png

1) 樣品形態不限,可以是固體(比如動/植物組織、種子、骨頭、土壤等),也可以是液體(比如菌液等);
2) 特殊設計的樣品管 (PULSE Tube) 保證了樣品、環境、操作者的安全,PULSE Tube可兼容多種試劑和溶液;

3) 操作者可以通過調整壓力、循環次數和溫度等參數,獲得最佳提取效果;
4) 只需幾分鐘,核酸、蛋白質等目標物質即從細胞或組織中快速釋放出來;
5) 最高可達35,000 psi作用于樣品,可使樣品釋放高質、足量的生物分子;
6) 樣品處理過程中受力均勻,整個過程不產熱,不會使熱敏感物質降解;
7) 電腦程序精確控制保證持續、均一的樣品提取,重現性高;
8) 樣品經處理后能直接用于PCR、核酸/蛋白電泳、二維電泳、蛋白印跡、親和層析等分析。



參考文獻:公安部物證鑒定中心《刑事技術》刊文

更多詳情,請關注gzcstrace 或電聯:020-87511070/ 020-87511229咨詢。


鷹洲科技刑警好幫手!





国产在线无码制服丝袜无码